FAQs

Preguntas frecuentes sobre los medios de cultivo Newcell

¿Cuanto tiempo se puede conservar el medio de cultivo una vez que es suplementado con suero?

En términos generales, una vez que el medio ha sido suplementado con suero se puede usar por entre 2 y 4 semanas.

Normalmente el suero se almacena congelado para conservar la actividad de los factores de crecimiento que contiene. Una vez agregado al medio de cultivo (generalmente al 10 %), debe ser conservado en heladera (2 – 8 °C) para evitar la precipitación de sales. A esta temperatura los factores de crecimiento presentes en el suero fetal gradualmente van perdiendo sus propiedades y la capacidad de promover el crecimiento celular es cada vez menor.

La experiencia indica que el tiempo de aptitud de un medio debe ser establecido para cada línea celular en particular ya que hay algunas mas delicadas que otras.

¿Por que no es recomendable congelar los medios líquidos como DMEM ó RPMI?

Estos medios contienen cationes divalentes (Ca2+, Mg2+) y algo de fosfato. Al congelar (o incluso algunas veces al bajar mucho la temperatura cerca de 0 °C) algo de estas sales precipita y luego se dificulta su solubilidad al llevar el medio a la temperatura de incubación de las células.

Observo un precipitado en el medio de cultivo, sin cambios en el pH ¿Que debería hacer?

Si el precipitado tiene forma de pequeñas fibras es probable que provenga de restos de fibrina que puede contener el suero fetal y aparecen luego de que este es descongelado. Estas se pueden eliminar por filtración o centrifugación antes de agregar el suero fetal al medio de cultivo.

En el caso de que el precipitado aparezca en el medio de cultivo, este puede deberse a sales de fosfato con los cationes divalentes. Si se ha utilizado un material de vidrio de uso rutinario en el laboratorio puede que se deba a restos de fosfato del detergente utilizado para lavar el material. En este caso, es recomendable cambiar de detergente y realizar mas lavados con agua deionizada antes de esterilizar el material. Si los precipitados han aparecido porque el medio ha sido congelado por error, pruebe de llevarlo a 37 °C y agite suavemente durante algunos minutos para disolver las sales. Si el precipitado persiste, es recomendable descartar el medio.

¿Cual es el porcentaje de CO2 recomendado en base al contenido de bicarbonato de sodio del medio de cultivo?

Si el medio contiene:
– NaHCO3 < 1.5 (g/L) , requiere 4 % de CO2 - NaHCO3 1.5-2.2 (g/L), requiere 5 % de CO2 - NaHCO3 2.2-3.4 (g/L) , requiere 7 % de CO2 - NaHCO3 > 3.5 (g/L), requiere 10 % de CO2
Estas son recomendaciones generales. Sin embargo, hay excepciones y como es conocido que el pH del medio tiende a bajar por la actividad metabólica de las células que acumula ácido láctivo, en NewCell hemos decidido preparar nuestro DMEM siguiendo las recomendaciones originales de Dulbecco por lo que le adicionamos 3.6 g/L de bicarbonato de sodio. Con esta formulación, ha sido utilizado sin problemas para mantener un pH fisiológico en los medios de cultivo en incubadores que utilizan CO2 entre 5 y 10 %.

¿Cual es la ventaja de agregar HEPES al medio de cultivo

Si bien el bicarbonato de sodio es el bufffer mas comunmente utilizado en medios de cultivo debido a su baja toxicidad, su capacidad buffer disminuye con el tiempo a medida que se genera CO2. Por este motivo, el agregado de HEPES proveerá una capacidad buffer adicional para mantener el medio a pH fisiológico (su rango de trabajo esta entre 6.8 y 8.0). De este modo, se puede extender el tiempo entre recambios de medio y se promueve un crecimiento mas saludable de las células, sin someterlas a una caída de pH.

¿ Por que algunos medios contienen piruvato de sodio?

El piruvato de sodio se agrega a muchos medios con bajo contenido de glucosa y a algunas formulaciones de DMEM. El piruvato puede ser utilizado como tal por las células como fuente de carbono por lo cual está inmediatamente accesible para pasos metabólicos críticos para el crecimiento celular. De este modo, no es imprescindible contar con que sea producido por las células a partir de glucosa o aminoácidos. En este sentido, algunas células requieren que el medio de cultivo contenga piruvato ya que carecen de la capacidad de convertir glucosa o aminoácidos a piruvato.

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